Изучение чувствительности полевых изолятов микроорганизмов рода Lactobacillus толстого отдела кишечника кур к антибактериальным препаратам

Афонюшкин В.Н., Юшков Ю.Г., Коптев В.Ю., Чупахина Н.В. ГНУ ИЭВСиДВ

Шкред О.В. ПФ «Сибирская Губерния»

 

Общеизвестен факт негативного действия антибактериальных препаратов на нормофлору кишечника с/х птицы. В то же время можно с уверенностью утверждать о неоднородном действии различных антибактериальных препаратов на различные компоненты нормофлоры.

Задачей данного исследования являлось выявление групп антибактериальных препаратов оказывающих минимальное ингибирующее действие на изучаемый спектр лактобактерий выделяемых из кишечника птиц.

 

Материалы и методы:

Объектом исследования служили лактобактерии выделяемые из кишечника кур 5 различных птицефабрик Новосибирской и Тюменской областей а также Красноярского края. Выделение чистых культур производили на твердой питательной среде MRS 2. Для этого на поверхность среды вносили 100 мкл гомогената кишечного содержимого разведенного 1:10000. Полученные чистые культуры наращивали на жидкой питательной среде АПТ, микроскопировали и типировали в ПЦР на принадлежность к роду Lactobacillus. Антибиотикорезистентность лактобактерий тестировали на 5% кровяном агаре с селективными добавками для лактобактерий (фирмы «Биолот»). Также проводили эксперименты по действию антибиотика на устойчивую к нему лактофлору на курах. Концентрацию лактобактерий в 1гр. кишечного содержимого выявляли методом полуколичественной ПЦР.

 

Результаты собственных исследований.

Как следует из таблицы №1 наибольшее количество изолятов проявляют чувствительность к хлорамфениколу (левомицетину), бета-лактамам (ампициллин, пенициллин), комбинированному препарату энроколи (энрофлоксацин+ колистин). Напротив, устойчивость по отношению к нитрофуранам, оксациллину, антибиотикам тетрациклинового ряда фиксируется у подавляющего большинства изолятов.

         Антибиотики фторхинолонового ряда, аминогликозиды, макролиды повидимому следует отнести к промежуточной группе, устойчивость к которым внутри рода Lactobacillus варьирует в значительной степени.

 

Таблица 1.  Спектр антибиотикорезистентности полевых изолятов лактобактерий кишечника кур.

изолят	Зоны задержки роста, мм
	оксациллин	ампициллин	доксициклин	офлоксацин	энрофлоксацин	тетрациклин	спектиномицин	энроколи	фуразолидон	левомицетин	пенициллин	эритромицин
TB SM	0	0	0	0	0	0	0	0	0	20	14	0
TB 2	0	16	0	20	14	0	0	30	0	26	16	10
TB 3	0	24	0	18	0	0	16	24	0	28	12	14
TB 1	8	24	0	0	0	0	14	0	0	16	14	14
Kut 7	0	30	24	0	0	24	18	16	0	34	20
Okt 1	0	0	0	0	0	0	16	20	10	24	0	0
NB 51	0	28	26	23	10	26	0	28	11	24	10	28
TB OfR	0	26	0	0	0	0	0	0	0	20	0	0
TB AmpR	0	0	9	0	0	0	0	16	0	22	0	0
TB ErmR	0	22	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
TB EKR	0	26	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0

         С целью изучения адекватности результатов полученных in vitro мы проанализировали ингибирующую активность антибиотика аминогликозидного ряда в отношении лактобактерий птиц содержащих устойчивый к терапевтическим концентрациям данного антибиотика изолят NB 6 (см. табл. 2).

Таблица 2 Сравнительная оценка антибиотикорезистентности лактобактерий диско-диффузионным методом, мм.

антибиотик	Зоны задержки роста изолятов
	NB6	SGP 10	SGD 1
пенициллин	24	14	20
сульфаниламид	-	-	-
неомицин	16	-	20
офлоксацин	18	-	24
энроколи	26	-	34
спектиномицин	-	-	26
польодоксин	-	-	-
энрофлоксацин	14	-	-
фуразолидон	-	-	8
ампициллин	32	-	26
оксациллин	8	-	-
левомицетин	20	-	32

 

После аэрозольной и пероральной обработки 2-х групп птицы данным антибиотиком, по истечении курса, у птицы 2-х опытных и одной контрольной групп были отобраны пробы кишечного содержимого. Методом количественной ПЦР было оценено содержание геномных эквивалентов лактобактерий в 1 гр. Кишечного содержимого.

Как следует из таблицы 3 введение апрамицина обусловило незначительное снижение содержания лактобактерий в кишечном содержимом с концентрации 2*10⁵   до 2*10^4.8 у птицы получавшей амингликозиды аэрозольно и до 2*10^4.2 геномных эквивалентов лактобактерий (ГЭ/1г). Следует отметить, что такое снижение весьма незначительно т.к. по результатам наших исследований снижение концентрации лактобактерий в 1г кишечного содержимого ниже 10⁴ обеспечивает пониженную устойчивость птицы к инфицированию сальмонеллой.

Таблица 3 Количество лактобактерий в 1г кишечного содержимого птицы опытных и контрольной групп (ГЭ/1г).

№ пробы	контроль	аэрозоль	выпойка
1	2*10 5	2*10 5	2*10 4
2	2*10 5	2*10 5	2*10 4
3	2*10 5	2*10 5	2*10 4
4	2*10 5	2*10 4	2*10 4
5	2*10 5	2*10 5	2*10 5
Ср. арифм	2*10 5	2*10 4.8	2*10 4.2

 

Заключение: Полученные данные позволяют вывести эмпирическую закономерность – наиболее выраженным ингибирующим действием на лактофлору птиц могут обладать антибиотики бетта-лактамного ряда и группы хлорамфеникола, соответственно после их применения компенсаторная терапия дисбактериоза строго обязательна. Также следует рекомендовать использование с профилактическими целями нитрофуранов, антибиотиков тетрациклинового ряда ввиду низкого процента чувствительных изолятов рода Lactobacillus.