Схема использования питательных сред: уриселект 4, среда биолот для лактобактерий, среда МРС для лактобактерий для диагностики дисбактериозов у птиц.

 

1. определение количества лактобактерий в 1гр кишечного содержимого

 

используемое оборудование и материалы:

автоматический дозатор 100-1000мкл

носики с фильтрами 100-1000мкл в штативе, стерильные (автоклавирование 120С-20-30мин, можно мыть и использовать повторно)

ложка фолькмана или люэра (измерить объем жидкости вмещаемой чашечкой ложки)

среда МРС разлитая по трехсекционным чашкам Петри

стерильный 24 луночный планшет

физраствор

пробирки с физраствором, стерильные

 

отбор материала: для исследования осуществляют отбор кишечного содержимого из слепых отростков кишок, либо отбор свежего помета (сразу после дефекации, желательно с минимальным наличием мочевой кислоты, не подсохший)

 

пробоподготовка: ложкой люэра, предварительно обожженной над пламенем спиртовки отобрать пробу помета, стерильным шпателем (или ножницами) удалить избыток помета, после чего целесообразно слегка взрыхлить пробу для лучшего отделения от ложки и внести ложку в пробирку тщательно взболтать, добиваясь переходя в физраствор пробы.

Количество физ.раствора в пробирке должно быть в 10 раз больше емкости ложки фолькмана, для получения 10 кратного разведения

После получения суспензии, следует приготовить 10 кратные серийные разведения

С использованием стерильных носиков и 24 луночного планшета, необходимо  получить разведения до 10⁵

В чашку Петри со средой МРС (для выделения лактобактерий) внести по 100 мкл разведений начиная от 10 ⁵ и заканчивая 10³ , таким образом, по 3 разведения каждой пробы вносятся на каждую чашку.

Чашку Петри заклеивают пленкой «парафильм» и инкубируют 16-24ч.

Лактобактерии растут в виде белых, иногда кремовых колоний с ровными краями, при микроскопии обнаруживаются Гр+ палочки, часто в виде цепочек, никогда не разветвляющихся и не образующих нитей. Также для лактобактерий не характерен рост при +5 С.

Для определения количества лактобактерий в 1гр помета, или кишечного содержимого, необходимо умножить количество колоний на степень разведения и еще на 10.

По результатам наших исследований, если количество лактобактерий менее 10 ⁴ кое/гр, то это сопровождается повышением риска инфицирования условно-патогенной микрофлорой. При отсутствии в таких пробах патогенной и условно-патогенной микрофлоры такое состояние можно отнести к дисбактериозу 1-й стадии.

Если при параллельном исследовании проб на условно-патогенную микрофлору высевается аэробные формы условно-патогенной микрофлоры (клебсиелла, протей, стафилококк), то такое состояние относят к дисбактериозу 2-й стадии, если данное состояние сопровождается диарейным синдромом то это дисбактериоз 3-й стадии.

 

2. определение чувствительности лактобактерий к антибиотикам

 

выделенные культуры лактобактерий следует посеять на селективную среду для выделения лактобактерий БИОЛОТ в виде газона и разложить диски с антибиотиками.

Чашку Петри заклеить парафилмом и инкубировать до появления роста. После чего замерить зоны задержки роста и те антибиотики к которым выявлена чувствительность к у лактобактерий, следует применять с осторожностью, либо избегать их применения.

Наиболее опасно использование антибиотиков в отношении которых прогнозируется постантибиотический дисбактериоз на птице сидящей в клетке, в период наиболее активного роста, пика продуктивности, для птицы которую кормят прогретыми кормами.

Такой птице следует обязательно давать жидкий пробиотик в период после отмены антибиотикотерапии и, полезно, незадолго до ее окончания. Следует избегать закисления рН кишечника при даче молочнокислых пропионовокислых и молочнокислых бактерий при одновременном использовании гентамицина или тетрациклинов.

 

3. Использование среды уриселект 4

 

Среда содержит индикаторы метаболической активности позволящие идентифицировать 4 группы микроорганизмов. Использование сред такого типа необходимо для высева культур патогенных и условно-патогенных бактерий находящихся в ассоциациях с широким спектром видов других энтеробактерий, а также удобны для контроля дисбактериозов в сочетании с тестами на лактобактерии.

 

Красные колонии – подозрение на кишечную палочку (требуется допроверить по реакции с индолом – можно капать реактив Ковача прямо на колонию, некоторые рекомендуют дополнительно ставить реакцию Фогеса Проскауэра, либо целесообразно использовать ).

Синие колонии - подозрение на наличие бактерий родов клебсиелла, энтеробактер, сератиа, сальмонелла.

Фиолетовые колонии – энтерококкус

Коричневые колонии с прокрашиванием среды вокруг колонии – протеус, провиденция, морганелла (среда содержит ингибитор подвижности P.vulgaris).

 

Допустимо использовать в качестве материала содержимое кишечника, мазки из паренхиматозных органов, легких, либо проверять колонии выросшие на селективных средах например Эндо, в этом случае бактериологической иглой на среде уриселект следует писать цифры с подозрительных колоний (с выросших цифр можно получать суспензии для дальнейших биохимических или серологических тестов).

 

При дисбактериозах избыток патогенной кишечной палочки отражает факт токсического протеолиза (поступающие с кормом протеины подвергаются микробной деструкции с образованием аммиака и других токсичных продуктов).

Избыток клебсиелл и протея свидетельствует об оксигенации кишечника что обусловлено недостаточной активностью лактобактерий и кишечных палочек и препятствует (помимо токсичности) росту нормофлоры.

 

 Афонюшкин В.Н. ГНУ ИЭВСиДВ

lisocim@mail.ru