Изучение эффективности использования инактивированной
вакцины в первые сутки жизни для профилактики болезни Гамборо у цыплят.
Некрутов А.В. (ООО «Томская ПФ»), Афонюшкин В.Н., Леонов С.В. (ГНУ ИЭВСиДВ)
Введение: инфекционная бурсальныя
болезнь (ИББ), представляется актуальной проблемой для современного
птицеводства: помимо ущерба обусловленного гибелью птицы от ИББ, существенную
роль играют и вторичные бактериальные инфекции
наносящие ущерб птицефабрикам на фоне иммунодефицитов вызванных полевым, либо
вакцинным штаммами ИББ (Ivanij
J., Morris
R. 1988). Поэтому исследование возможности
использования инактивированной вакцины в первые сутки жизни цыпленка имеет
определенные перспективы, а именно – выработка специфического иммунитета (как
гуморального, так и клеточного), в возможно более ранний период, возможность
избежать риска развития иммунодепрессивных эффектов обусловленных активностью живого вакцинного
штамма. В то же время у такой технологии есть свои минусы – риск развития
болезни иммунных комплексов, риск инактивации вакцины
трансовариальными антителами (Baxendale W., Lutticken D.1981).
Материалы и методы
Цыплят прививали инактивированной вакциной против ИББ,
(см. табл 1). В качестве
контроля использовали птицу привитую живой вакциной.
Были взяты 10 подгрупп
цыплят по 80
голов в каждой.
1-я контрольная группа
не прививалась против
ИББ, остальные 9
групп были разделены
на 3 группы в
которой привили цыплят
разной дозой вакцины
против ИББ (0,1
мл, 0,2 мл,
0,3 мл). Также эти 3 группы
были разделены на 3 подгруппы в
которых вакцинация проводилась
в разные дни
(1 день, 5
день, 10 день).
В 1-й день
вакцинация цыплят против
ИББ проводилась с
помощью полуавтоматического инъектора ИП – 1.
На 5-й и
10-й дни с
помощью шприца «Сокорекс». С
целью исключения перегруппировки цыплят
во время опыта
они были помечены
разной по цвету
краской в различных
частях тела.
У птицы брали пробы крови в возрасте 1, 5, 10, 21, 28,
42 дня полученную сыворотку тестировали методом ИФА на уровень титров антител к
ИББ, вирусу инфекционного бронхита кур (ИБК) и вирусу болезни Ньюкастла (НБ), для выявления возможных негативных эффектов
вакцинации анализировали активность кислой фосфатазы (КФ)? уровень
циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и концентрацию креатинина.
Табл.1 Схема
эксперимента
|
группа |
Возраст вакцинации
птицы, сут |
доза |
|
1 |
|
контроль |
|
2 |
1 |
Доза 0,1 мл. (3,0 Lg ) |
|
3 |
5 |
Доза 0,1 мл. (3,0 Lg ) |
|
4 |
10 |
Доза 0,1 мл. (3,0 Lg ) |
|
5 |
1 |
Доза 0,2 мл. (6,0 Lg ) |
|
6 |
5 |
Доза 0,2 мл. (6,0 Lg ) |
|
7 |
10 |
Доза 0,2 мл. (6,0 Lg ) |
|
8 |
1 |
Доза 0,3 мл. (9,0 Lg ) |
|
9 |
5 |
Доза 0,3 мл. (9,0 Lg ) |
|
10 |
10 |
Доза 0,3 мл. (9,0 Lg ) |
Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов
определяли по методу (Гриневич Ю.А., 1988) Метод
основан на селективной преципитации комплексов АТ-АГ в 3,75 % ПЭГ (полиэтиленгликоля) с последующим определением плотности
преципитата. Реактивы: 
при 450
нм. Расчет: Высчитывают разность показателей оптической плотности, результат
умножают на 1000 и получают количество ИК в 100 мл сыворотки. Ответ выражают в
единицах оптической плотности. - количество
ЦИК в 100 мл сыворотки.
Титры антител, концентрацию креатинина, активность
кислой фосфатазы определяли с использованием коммерческих наборов в
соответствии с прилагаемыми наставлениями.
Результаты собственных исследований и обсуждение.
Таблица
№ 2 Результаты серологических исследований
после применения инактивированной вакцины
против ИББ на
цыплятах бройлерах в
ООО «Птицефабрика Томская».
|
Наименование работ |
Контроль |
Доза 0,1 мл. (3,0 Lg ) |
Доза 0,2 мл. (6,0 Lg ) |
Доза 0,3 мл. (9,0 Lg ) |
||||||
|
1 день |
5 день |
10день |
1 день |
5 день |
10 день |
1 день |
5 день |
10 день |
||
|
Номера групп |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
|
1 сут. - ИББ, - НБ |
2304
9512 |
660
8031 |
623
5404 |
2581 7656 |
4164
8900 |
727
8915 |
3732
8488 |
2426 7639 |
1462 6197 |
3905
9300 |
|
5 дней - ИББ, - НБ - ИБК |
1257
2500 3802 |
3567 4888 2852 |
4009
5585 2433 |
1582
2963 1390 |
3164 3173 4116 |
7754
3975 6758 |
1140 7017 3392 |
579 6127 1438 |
1896 2980 2353 |
1610
4000 3816 |
|
в 21 день - ИББ - НБ - ИБК |
753
1131 1863
|
388
804 868 |
414
676 1155 |
2564
764 470 |
433
680 379 |
501
817 706 |
4011 653 444 |
643
1140 1266 |
768 619 1047 |
986
1224 452 |
|
В 28 дней на ИББ, - НБ, - ИБК, |
382 1721 3375 |
321 1668 5820 |
991
1600 2653 |
338 1338 3435 |
330 1795 3938 |
322
1591 2411 |
359 2009 3395 |
249
1309 4399 |
470 3089 5380 |
452 1765 4510 |
|
В 42 дня на ИББ, - НБ, - ИБК, |
280 11063 13080 |
5799 11412 13549 |
7853 10227 9323 |
7459
9917 6247 |
11303
10941 14347 |
6805 9286 15703 |
8004
12538 12207 |
10956 6888 13110 |
10792
15515 12119 |
8854 14139 9273 |
Статистически достоверных
различий между уровнем титров антител при использовании различных доз вакцины и
различных сроков вакцинации не обнаружено, (см
табл.№2). Что говорит об отсутствии ингибирования вакцины антителами в диапазоне
титров от 600 до 4164.
Таблица 3. Активность кислой фосфатазы (нмоль/л*с) в сыворотке крови птицы опытных и контрольной групп в различные
возрастные периоды
|
|
группа
1 |
группа 2 |
группа 3 |
группа
4 |
группа
5 |
группа
6 |
группа
7 |
группа
8 |
группа 9 |
группа
10 |
|
возраст 1 сутки |
||||||||||
|
M+m |
140,44 +6,47 |
195,58 +31,98 |
173,88 +17,58 |
255,24 +44,73 |
172,58 +29,4 |
163,92 +25,33 |
178,08 +57,14 |
187,4 +57,17 |
179,1 +16,14 |
175,88 +23,73 |
|
Сv |
10,28 |
36,464 |
22,55 |
39,08 |
38 |
34,46 |
71,55 |
68,04 |
20,1 |
30,09 |
|
возраст 5
суток |
||||||||||
|
M+m |
98,02 +1,3 |
99,36 +27,65 |
150,86 +24,88 |
198,66 +31,6 |
149,5 +31,5 |
123,16 +6,67 |
101,5 +4,76 |
101,76 +6,06 |
159,88 +54,67 |
149,6 +35,76 |
|
Сv |
2,97 |
62,07 |
36,78 |
35,47 |
47,08 |
12,08 |
10,47 |
5,96 |
76,26 |
53,315 |
|
возрасте 21 сутки |
||||||||||
|
M+m |
230,46 +43,22 |
171,82 +30,35 |
169,62 +36,51 |
164,64 +30,44 |
206,58 +36,79 |
211,6 +45,57 |
217,76 +28,55 |
186,08 +30,27 |
168,86 +34,05 |
111,78 +6,904 |
|
Сv |
41,82 |
39,39 |
48 |
41,23 |
39,72 |
48,02 |
29,23 |
36,28 |
44,97 |
13,77 |
Рис.1 Динамика изменения активности кислой фосфатазы в сыворотке крови.
Таблица 4. Концентрация циркулирующих
иммунных комплексов (ед./мл) в сыворотке крови птицы опытных и контрольной
групп в различные возрастные периоды
|
|
Группа 1 |
Группа 2 |
Группа 3 |
Группа 4 |
Группа 5 |
Группа 6 |
Группа 7 |
Группа 8 |
Группа 9 |
Группа 10 |
|
возраст 1 сутки |
||||||||||
|
M+m |
32,2 +3,2 |
13,8 +2,23 |
30,2 +3,7 |
11,2 +2,02 |
15,6 +3,73 |
11 +2,08 |
10 +0,73 |
10 +0,89 |
7,8 +1,65 |
13,4 +2,49 |
|
Сv |
34,99 |
44,56 |
29,52 |
35,0 |
45,34 |
53,11 |
14,6 |
20,26 |
25,95 |
24,8 |
|
возраст 5
суток |
||||||||||
|
M+m |
15,2 +1,97 |
13,4 +3,86 |
20,8 +4,14 |
7,8 +3 |
18,8 +2,77 |
13,4 +0,08 |
12,6 +0,07 |
10,4 +2,7 |
12,6 +3,79 |
3 +0,03 |
|
Сv |
24,25 |
50,25 |
33,6 |
50,81 |
23,69 |
7,07 |
9,05 |
43,9 |
60,25 |
17,22 |
|
возрасте 21 сутки |
||||||||||
|
M+m |
3 +0,49 |
1,4 +0,07 |
1,4 +0,06 |
5 +0,72 |
2,2 +0,28 |
2,4 +0,5 |
1,2 +0,09 |
4,4 +1,38 |
7,2 +1,033 |
6,2 +1,77 |
|
Сv |
11,05 |
17,52 |
10,14 |
12,6 |
19,89 |
13,44 |
20,12 |
45,83 |
22,98 |
45,68 |
Рис.2 Динамика изменения концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови.
Зависимости активности кислой фосфатазы (КФ) и
концентрации ЦИК от времени вакцинации и дозы вводимого антигена не выявлено
(см. рис №№1,2). В то же время высокая вариабельность изучаемых показателей
(см. табл 3-4)
свидетельствует о неоднородности птицы по иммунобиолхимическому
статусу. Отсутствие значимого влияния используемой вакцины на уровень ЦИК,
свидетельствует о том, что антигенный прессинг обусловленный посторониими
факторами в значительно большей степени воздействует на иммунобиохимический
статус птицы, чем используемая вакцина.
Данный факт следует считать позитивным применительно к изучаемой вакцине
и схемам вакцинации т.к. свидетельствует о ее низкой реактогенности
в широком диапазоне доз и схем введения в условиях данной птицефабрики.
Проведенная, оценка уровня креатинина – маркер
патологии почек, показывает высокое разнообразие клинико-биохимических значений
этого параметра. Т.е. функция почек страдает у значительной части птицы. Этот
факт согласовывается с результатами остальных биохимических исследований и
свидетельствует об интенсивном воздействии токсикантов
и патогенов инфекционной природы на птицу.
|
|
|
|
Рис.3 Вариационная кривая распределения суточных цыплят по концентрации ЦИК |
Рис.4 Вариационная кривая распределения цыплят по концентрации ЦИК в возрасте 5 суток |
|
|
|
|
Рис. 5 Вариационная кривая цыплят по концентрации ЦИК в возрасте 10 суток |
|
Высокая вариабельность изучаемых признаков, в
частности концентрации ЦИК, заставляет изучить однородность изучаемых выборок,
как следует из вариационных кривых (см. рис 3-5) наиболее неоднородны по
концентрации ЦИК суточные цыплята, что, по-видимому
связанно с активным попаданием в организм различных антигенов и в то же время
еще не сформировавшимися механизмами специфического иммунитета. К возрасту 5
суток цыплята становяться более однородными по
изучаемому параметру т.е. как активность проникновения
нового антигенного материала, так и выраженность
адаптивных иммунологических реакций сопровождающихся элиминацией антигенного материала становяться
более или менее одинаковыми. И. наконец к 10 суткам, механизмы местного иммунитета,
по видимому позволяют
в значительной мере предотвращать попадание антигенов в организм,
поэтому основная масса птицы имеет низкие значения ЦИК.
В
то же время коэффициент корелляции ЦИК и КФ
отрицательный и варьирует от -0,12 до – 0,22 у птицы разного возраста.
Отрицательная корелляция между этими двумя
параметрами может быть связана с тем что при наличии специфических антител к
встреченному антигену у птицы образуются ЦИК, а в противном случае
активизируются процессы фагоцитоза сопровождающиеся повышением
активности КФ.
Рис 6 изучение взаимосвязи между концентрацией ЦИК и активностью КФ у цыплят в возрасте 10 суток.
Как видно из диаграммы 6 популяция птицы на
исследуемой птицефабрике, разбивается минимум на 3 группы с различными связями
между концентрацией ЦИК и активностью СМФ (системы мононуклеарных
фагоцитов).
Таким образом, в условиях массированного бактериально - вирусного давления, стресса с которым
сталкивается цыпленок на птицефабрике, начиная с первых суток жизни,
дополнительное парентеральное введение
антигена не способно превзойти по своим биологическим эффектам воздействие
всего комплекса инфекционных агентов и стрессовых воздействий встречающиегося на птицефабриках.
Заключение: Отсутствие выраженного прироста циркулирующих
иммунных комплексов и изменения активности кислой фосфатазы у цыплят привитых
инактивированной вакциной против ИББ при наличии титров антител против ИББ в
диапазоне от 600 до 2000 свидетельствует о наличии других, более интенсивно воздействующих на иммунную систему факторов, чем вакцинация
против ИББ. В этом аспекте вакцинация цыплят инактивированной вакциной в
суточном возрасте в условиях промышленного выращивания птицы достаточно
безопасна.
Summary
Analysis
of productivity of an inactivated vaccine per the maiden day of life for
preventive measures of illness Gamboro
for chickens.
The
study of possibility of using of an inactivated vaccine per the maiden day of
life of a chicken has definite outlooks, namely - development of particular
immunity (both humoral, and cell-like), in probably earlier period, possibility
to avoid hazard of progressing of immunodepressive effects conditioned by
activity living vaccine of the
strain.
Литература:
Ivanij J., Morris
R. Immunodeficiency in the chicken. An immunologikal study of infectious bursal
disease. Clin. Exp. Immunol. 23:154-165, 1988
Baxendale W., Lutticken
D. The results of field trials with an inactivated Gamboro vaccine. Dev. Biol. Stand. 51:211-219,
1981