Трансформация CaCl (упрощенный метод).

 

1. Подготовка компетентных клеток:
2. Ночную культуру, в 10 мл пробирке, помещаем на лед -20, на 10 мин.
3. Центрифугируем 4000 об/мин 10 минут, удаляем супернатант.
4. Добавляем 1 мл ледяного 0,1М CaCl₂, выдерживаем 5 минут при -20 (на льду).
5. Центрифугируем 4000 об/мин 10 минут, удаляем супернатан.
6. Добавляем 250мл ледяного 0,1М CaCl₂ , выдерживаем на льду до использования.

 

Реактивы:

1. L-бульон: 1% триптон; 0,5% дрожжевой экстракт; 200 мМ NaCl. Стерилизуется.
2. 100 мМ CaCl – готовиться из 1М концентрата, хранящегося при -20. Разбавляем в 10 раз, храним на льду.