К вопросу об использовании ПЦР для диагностики и планирования профилактических мероприятий против микоплазмоза птиц.

Афонюшкин В.Н., Юшков Ю.Г.,

 

 

ПЦР можно использовать в процессе реализации двух задач.

1   диагностика

2 мониторинг инфицированности микоплазмой с целью выработки мер по борьбе с инфекцией и контроля эффективности этих профилактических мероприятий.

 

Сразу подчеркнем, речь идет об использовании ПЦР в комплексе диагностических мероприятий включающих патологоанатомические вскрытия, анализ клинического состояния птицы, эпизоотологических исследований.

 

Диагностика

Рассмотрим этот аспект на примере одной из наших экспертиз.

У птицы – бройлера отмечалась патология опорно-двигательного аппарата в возрасте 25-30 дней. У врача возникло предположение, что причиной данной патологии является Micoplasma. synovia

Однако по результатам ПЦР мы выявили более высокий уровень инфицированности легких, печени и почек M.gallisepticum (МГ) чем M. Synovia (MC).

Полученные данные вполне закономерны. Ввиду того, что  МГ более контагиозна так как с большей эффективностью поражает респираторную систему то и уровень инфицированности должен быть выше. Следует учитывать тот факт, что вакцинация против МГ как правило позволяет предотвратить клинические проявления заболевания и минимизировать ущерб наносимый данной инфекцией, но крайне маловероятно чтобы она  прекратила сам процесс инфицирования птицы (т.е. носительства).

 

Ввиду вакцинации контроль инфицированности МГ с помощью серологических методов будет малоэффективен за исключением контроля инфицированности бройлеров на убое.

 

В данной ситуации МГ как и МС может вызывать поражения суставов в связи с тем что суставы защищены от антител и вакцинация скорее всего не позволит предотвратить появление суставной формы микоплазмоза в отличие от респираторной. Кстати именно по этой причине, на наш взгляд, и не удалось разработать эффективной вакцины против МС.

 

На данном этапе, только с помощью ПЦР можно определить роль МС  и МГ в развитии патологии опорно-двигательного аппарата. Если в пораженных суставах не будет выявлен возбудитель микоплазмоза (в большей части проб) то этиология поражений суставов другая.

В ряде случаев мы действительно подтверждали методом ПЦР этиологическую роль MC в развитии воспалений суставов, но нередко встречались ситуации, когда результаты ПЦР, при исследовании материала из полостей пораженных суставов, четко и недвусмысленно свидетельствовали об отсутствии роли микоплазм в развитии данной патологии. Иногда удавалось установить истинную причину опять таки с помощью ПЦР, например, на наличие пастерелл. Иногда для постановки диагноза более эффективным было использование ИФА, например, выявление наличия сероконверсии у пораженной птицы к реовирусу.

Довольно полезно для определения направленности диагностических исследований проведение патогистологических исследований. Например, можно определиться с воспалительным характером поражений суставов, иногда можно увидеть наличие бактерий в пораженных очагах, при некоторых незаразных патологиях можно довольно четко выявить признаки недостатка витамина Д, марганца, холина, кальция, фосфора и т.д.

 

 

мониторинг инфицированности

 

Ввиду того, что курсы антибиотикотерапии микоплазмоза по продолжительности составляют незначительную долю от всей продолжительности сроков выращивания, то использовать ИФА для определения времени применения антибиотика нецелесообразно. Ведь к тому времени когда появятся антитела применять антибиотик поздно. Антитела свидетельствуют лишь о том, что птица когда то встретилась с антигеном. Использование в качестве критерия инфицированности клинических проявлений заболевания тоже не совсем эффективно по причине того, что желательно использовать тилозин с целью профилактики, а не лечения.

         Не менее актуально выявление неблагополучных стад на стадии загрузки корпусов, антитела на этой фазе не имеют существенного диагностического значения, но принципиально важно выявить заведомо неблагополучные корпуса дабы перераспределить ветеринарные затраты на профилактику микоплазмоза в первую очередь в их пользу.

 

 

 

 

Таким образом можно выстроить 3 типа ветеринарных мероприятий по профилактике микоплазмоза как на промышленном так и родительском поголовье

1.     тип  - базовый или стандартный: в суточном возрасте нет антител в ИФА к МС и нет МГ и МС в ПЦР

2.     тип - работа с группами повышенного риска: (где выявлена инфицированность микоплазмой МГ или МС на начальных сроках выращивания в ПЦР, наличие антител к МС в ИФА)

3.     тип ситуационный  выявлено наличие клинических проявлений респираторной и/или суставной формы микоплазмоза и эти патологоанатомические изменения верифицированы с использованием ПЦР

 

Соответствующим образом можно распределить средства например 1 тип 70% 2 тип 20% 3 тип 10% в зависимости от реальной распространенности групп птицы с проявлением клинических форм микоплазмоза.

 

Для родительских стад принципиально важен ПЦР мониторинг МГ в связи с тем, что наличие вакцинных титров антител мешает выявить наличие возбудителя методом ИФА. В то же время реально накопить информацию о пороговых уровнях антител в наибольшей степени снижающих инфицированность МГ и проводить антибиотико-профилактику с учетом этих данных.

 

Схемы отбора проб

Ремонтный молодняк и родители		бройлеры
Постоянный мониторинг	Выработка схем	Постоянный мониторинг	Выработка схем
В возрасте 1-5 сут 23 пробы на ИФА МС и/или столько же проб на ПЦР МГ/МС (для индюков +ММ)	К моменту убоя родительского стада одновременно ИФА и ПЦР с целью выявления протективных тиров антител.	В возрасте 1-5 сут 23 пробы на ИФА МС и/или столько же проб на ПЦР МГ/МС (для индюков +ММ)	К моменту убоя ИФА и/или ПЦР на МГ и МС у групп птицы с разными схемами профилактики
Перед вакцинацией из конъюнктивального мешка до 10 проб ПЦР на МГ и сыворотка на  ИФА МС/МГ На пике иммунного ответа ПЦР на МГ и МС материал из трупов и 23 пробы на МГ С целью определения группы риска	Отбор проб до и после обработки тиланом с учетом антибиотиков первого эшелона (чтобы узнать какой антибиотик первого эшелона лучше уменьшает разрушение тилана в кишечнике)		Отслеживание динамики инфицирования По 5 проб с интервалом 3-5 дней Или по 10-15 проб с интервалом 7-10 дней с целью определения сроков профилактических обработок
	Эксперимент на бройлерах – привить против МГ и посмотреть на  убое при каких титрах уровень инфицированности МГ наименьший Не менее 100 проб ПЦР и ИФА

 

 

Обращаем Ваше внимание на необходимость контроля поголовья индюков в плане инфицированности МГ, МС, ММ и других инфекционных агентов например, ОРТ.

Учитывая более длительные сроки выращивания индюков потери от микоплазмоза могли бы быть более существенными, чем на бройлерах

Для родительских стад принципиально важно контролировать инфицированность МГ, МС, ММ и ОРТ к началу яйцекладки (трупный материал, истечения из носа, пробы спермы).

 

Заключение: Ввиду трудоемкости и кропотливости микробиологических методов выявления микоплазм в патологическом материале, рутинные лабораторные тесты используемые в диагностике микоплазмозов птиц, должны основываться на ПЦР и ИФА методах.