Результаты определения чувствительности к антибиотикам микрофлоры фекалий теленка
Результаты определения чувствительности к антибиотикам микрофлоры фекалий теленка методом бумажных дисков с антибиотиками (метод диффузии в агар).
Суспензия микроорганизмов была засеяна газоном на МПА, затем в чашку поместили диски с антибиотиками: витар, левомицетин, стрептомицин, тетрациклин, мономицин, полимиксин, энрофлон.
Сплошные зоны задержки роста (зоны максимальной задержки роста) отутствовали. Зоны минимальной задержки роста дал полимиксин (5-6мм) и, в меньшей степени, витар и левомицетин (4 и 3 мм. соответственно)
.Из зон задержки роста этих антибиотков были взяты пробы с целью подбора дополнительных антибиотиков. Дальнейшие исследования проводились с использованием новой тест-системы для количественного определения антибиотико-резистентности.
Таблица №Схема расположения антибиотиков на
микротитровальной пластине.
№ |
Антибиотик |
1 |
Витар |
2 |
Левомицетин |
3 |
Стрептомицин |
4 |
Тетрациклин |
5 |
Мономицин |
6 |
Полимиксин |
7 |
Энрофлон |
8 |
Рефлин |
9 |
Абактал |
10 |
Гентамицин |
11 |
Пипемидиновая кислота |
12 |
Без антибиотиков |
Таблица №
2 Схема высева проб
Проба |
|
A |
Полимиксин зона А (ближе к краю диска) |
B |
Полимиксин зона В (дальше от края диска) |
C |
Витар |
D |
Левомицетин |
E |
Энрофлон |
F |
Интактная микрофлора |
G |
Контроль стерильности и точки калибровки |
H |
Микрорганизм из единчной колонии (зона А полимиксин) |
Таблица №
3 Визуальная оценка данных.
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
B |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
C |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
D |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
E |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
F |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
G |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
H |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
Интактная микрофлора эффективно подавляется в лунках Ф 3,6,10,11 т.е. полимиксином, стрептомицином
, гентамицином, пипемидиновой кислотой. Однако в ее составе есть микроорганизмы, которые быстро приобретают устойчивость к этим антибиоткам. Микрофлора устойчивая к полимиксину будет устойчива и к остальным антибиотикам. Перспективна пипемидиновая кислота по отношению к части устойчивой к полимиксину микрофлоры. Приобретение устойчивости к левомицетину одновременно приводит к приобретению устойчивости, как минимум , к полимиксину, гентамицину, стрептамицину, пипемидиновой кислоте, что свидетельствует о сцепленности наследуемости и экспрессии факторов резистентности к данным антибиотикам.Довольно перспективен в данной ситуации витар. Чувствительнсть микрофлоры к нему довольно умеренная
, но вероятно механизмы устойчивости к витару совершенно другие. Это естественно, ведь и механизм действия витара другой. Поэтому микрофлора устойчивая к витару становится более чувствительной к другим антибиоткам С4, 6, 7, 8, 9, 10, 11 (тетрациклин, полимиксин, энрофлон, пипемидиновая кислота, гентамицин, рефлин,абактал). Возможно это связанно с понижением гетерогенности микрофлоры. Единичный компонент микрофлоры устойчивой к полимиксину, более чувствителен к антибиотикотерапии, он чувствителен к тетрациклину, левомицетину, пипемидиновой кислоте.Таблица №
4 Экстинкция проб.
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
0,34 |
0,31 |
0,37 |
0,15 |
0,27 |
0,38 |
0,27 |
0,29 |
0,34 |
0,29 |
0,08 |
0,43 |
B |
0,32 |
0,22 |
0,35 |
0,16 |
0,33 |
0,37 |
0,22 |
0,22 |
0,27 |
0,19 |
0,06 |
0,43 |
C |
0,07 |
0,1 |
0,1 |
0,09 |
01 |
0,07 |
-0,02 |
0,04 |
0,00 |
0,02 |
0,01 |
0,33 |
D |
0,28 |
0,47 |
0,49 |
0,26 |
0,36 |
0,35 |
0,3 |
0,35 |
0,45 |
0,32 |
0,13 |
1,02 |
E |
0,3 |
0,23 |
0,42 |
0,3 |
0,35 |
0,4 |
0,00 |
0,22 |
0,25 |
0,25 |
0,01 |
0,96 |
F |
0,3 |
0,38 |
-0,03 |
0,35 |
0,33 |
0,08 |
0,3 |
0,34 |
0,3 |
-0,05 |
0,04 |
1,07 |
G |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
H |
0,34 |
0,02 |
0,37 |
0,03 |
0,27 |
0,32 |
0,3 |
0,14 |
0,18 |
0,25 |
0,01 |
0,46 |
Таблыцы № 4
и 5 позволяют количественно оценить эффективность работы антибиотков и, соответственно, сравнить их друг с другом по бактериостатическому эффекту. Высевы микрофлоры из зон задержек роста, позволяют прогнозировать изменение антибиотикорезистентности микрофлоры после лечения некоторыми антибиотиками: витаром, левомицетином, полимиксином, энрофлоном. Традиционный метод исследования микрофлоры на антибиотико-резистентность позволяет отдать предпочтение полимиксину и левомицетину, однако использование нового метода позволяет сделать вывод, что после применения этих антибиотиков, эффективность использования ряда антибиотиков резко снизится (см. табл.№ 4). Наиболее перспективен, в этом отношении витар. После его применения повышается чувствительность к гентомицину и энрофлону, сохраняется чувствительность к пипемидиновой кислоте, однако несколько возрастает устойчивость к полимиксину (см. табл.5). Любопытно что микрофлора высеянная из агара прилегающего к диску с энрофлоном, оказалась чувствительна к нему же, интактаня микрофлора осталась устойчивой к этому антибиотику, несмотря на изменения условий культивирования. По видимому, энрофлон изменяет состав микрофлоры, при высоких его концентрациях в агаре микроорганизмы выживают, т.к. на твердой питательной среде концентрация антибиотико-разрушающих ферментов вокруг бактериальной клетки выше ввиду незначительной диффузии в агаре. В интактной микрофлоре (ранее подвергавшейся воздействию энрофлона) видимо есть виды защищающие мкрофлору и на жидкой питательной среде, однако применение энрофлона в высоких концентрациях, повидимому уничтожает эти виды, повышая чувствительность остальной микрофлоры к данному антибиотику. Интактаная микрофлора также чувствительна к стрептомицину, гентамицину, пипемидиновой кислоте. Энрофлон и стрептомицин эффективнее работают в жидких средах, вероятно микрорганизмы адсорбированные на стенке кишечника и покрытые слизью будут к ним устойчивы. Можно предположить повышенную устойчивость к этим антибиотикам у кислотопродуцирующих штаммов в присутствии муцина, однако сам муцин понизит метаболическую активность этих штаммов. На отдельный изолят из полимиксинорезистентной микрофлоры оказывают действие тетрациклин, левомицетин и пипемидиновая кислота. Тетрациклин и энрофлон, также хорошо сохраняют свой бактериостатический эффект. Наиболее эффективной оказалась пипемидиновая кислота. Однако у нас отсутствуют данные по скорости нарастания резистентности микрофлоры к данному антибиотику. Это не дает возможности давать прогноз при его использовании.Таблица №
5 Активность роста микроорганизмов в присутствии антибиотиков в сравнении с ростом на среде без антибиотиков, %.
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
79.07 |
72.09 |
86.04 |
34.88 |
62.99 |
88.37 |
62.79 |
67.44 |
79.07 |
67.44 |
18.6 |
100 |
B |
74.41 |
51.62 |
81.39 |
37.21 |
76.74 |
86.04 |
51.62 |
51.16 |
62.79 |
44.18 |
13.95 |
100 |
C |
21.21 |
30.3 |
30.3 |
27.27 |
30.3 |
21.21 |
-0.06 |
12.12 |
0 |
6.06 |
3.03 |
100 |
D |
27.45 |
46.07 |
48.039 |
25.49 |
35.29 |
34.31 |
29.41 |
34.31 |
44.11 |
31.37 |
12.74 |
100 |
E |
31.25 |
23.95 |
43.75 |
31.25 |
36.45 |
41.66 |
0 |
22.91 |
26.049 |
26.041 |
1.01 |
100 |
F |
28.037 |
35.51 |
-0.02 |
38.037 |
30.84 |
7.47 |
28.03 |
31.77 |
28.03 |
4.67 |
3.73 |
100 |
G |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
H |
73.01 |
4.34 |
80.43 |
6.52 |
58.59 |
69.56 |
65.21 |
30.43 |
39.14 |
54.34 |
2.17 |
100 |
Таблица №
6 Усредненные по всем пробам показателиэффективности антибиотиков.
№ |
Антибиотик |
Средняя экстинкция |
1 |
Витар |
0,243 |
2 |
Левомицетин |
0,216 |
3 |
Стрептомицин |
0,251 |
4 |
Тетрациклин |
0,167 |
5 |
Мономицин |
0,251 |
6 |
Полимиксин |
0,2462 |
7 |
Энрофлон |
0,1725 |
8 |
Рефлин |
0.2 |
9 |
Абактал |
0.2325 |
10 |
Гентамицин |
0.22 |
11 |
Пипемидиновая кислота |
0,0425 |
12 |
Без антибиотиков |
0,5875 |
Примечание: чем выше показатель тем ниже
эффективность задержки роста.
Рекомендации.
Микрофлора фекалий отличается высокой устойчивостью к широкому спектру антибиотиков, не работают даже новейшие и мощнейшие антибиотики (рефлин и абактал) хотя они не применялись в хозяйстве. Данные позволяют спланировать несколько этапов антибиотико-терапии в хозяйстве. На интактную микрофлору может быть оказано воздействие следующими антибиотиками: полимиксин, левомицетин, витар, гентамицин, стрептомицин. Следует помнить о сцепленной устойчивости к антибиотикам. После применения полимиксина и левомицетина вы не сможете эффективно применять остальные антибиотики за исключением пипемидиновой кислоты. Поэтому рекомендуем в течение какого-то времени использовать витар, дополняя лечение при необходимости гентамицином, энрофлоном и пипемидиновой кислотой (тем более что сам витар не отличается высокой активностью). Желательно использовать гентамицин, энрофлон и пипемидиновую кислоту только после потери эффективности витара. Возможно удастся провести несколько циклов, поочередно сменяя витар и остальные антибиотики. Пипемидиновую кислоту не следует применять сейчас, лучше оставить ее как антибиотик запаса, когда перестанут работать все остальные антибиотики, знание механизмов формирования устойчивости к этому антибиотику позволило бы точнее указать ее место в терапевтических схемах и дать долгосрочный прогноз. Следует не забывать о довольно высоком бактериостатическом эффекте тетрациклина (в условиях данного хозяйства), устойчивость к нему не сцеплена с полимиксином, левомицетином, витаром, энрофлоном. Следовательно вы можете применять этот препарат после лечения этими антибиотиками. Энрофлон не потерял полностью свою актуальность в хозяйстве, хотя, по видимому, именно его использование заблокировало для вас возможность использования рефлина, абактала и ряда других антибиотиков. Следует использовать его в максимальных терапевтических дозах, строго выдерживая кратность введения и учитывая тропизм возбудителя в кишечнике. Перед его применением следует уничтожить часть энрофлонорезистентной микрофлоры витаром. Гентамицин также обычно длительно сохраняет свою эффективность.
К циркуляции антибиотикорезистентных штаммов в хозяйстве необходимо подходить с эпизоотологических позиций. Применяя
, какую либо терапевтическую схему, в какой либо группе животных, постарайтесь ограничить миграцию устойчивых к данному антибиотику микроорганизмов в другие группы. Принцип разрыва эпизоотической цепочки здесь не менее эффективен. Важно знать какие антибиотики применять в разных технологических группах. Либо использовать антибиотики общие для всех групп. А потом их заменять на новые в тех группах, где чувствительность к старым антибиотикам понизилась, не допуская циркуляции устойчивых к новым антибиотикам штаммов внутри хозяйства. Все схемы антибиотикотерапии не должны использоваться одновременно, вразнобой во всех технологических группах. Спланируйте последовательность смены антибиотиков. Попытайтесь отыскать эффективные циклы замены антибиотиков. Если используете, одновременно несколько схем. Постарайтесь привязать разные схемы, к разным изолированным группам животных не допуская перекрестного использования этих схем. Надеемся, что правильное использование этой информации позволит вашему хозяйству протянуть еще какое-то время.