С целью изучения влияния препарата на раневой процесс хирургическим путем наносили кожные раны. Эксперименты проводили на лабораторных крысах линии Вистар. В каждой группе находилось по 5 животных. Животных первой опытной группы обрабатывали препаратом 1 раз в сутки. Животных второй группы - 2 раза в сутки. Животные контрольной группы лечению не подвергались. С целью забора материала животные выводились из эксперимента в 3, 6 и 13 дней после нанесения раны. Для исследования брали фрагменты регенерирующей кожи и регионарные лимфоузлы (лимфоузел кожной складки). Материал фиксировали в 12% формалине, готовили парафиновые срезы которые окрашивали гематоксилином Брусси и эозином. Морфометрические исследования проводили по методике Автандилова А.Г. (1986) с использованием окулярной тест-сетки Автандилова. Цифровые данные обработали методами вариационной статистики.

К концу эксперимента эпителизация раны закончилась, в этот период мы наблюдаем восстановление гистоструктуры эпидермиса. Во всех группах он приобретает многослойное строение. Начинает образовыватся роговой слой. Тем не менее в регенерирующей коже всех групп можно встретить признаки неполноценной дифференцированности. Они выражаются в наличии незрелых клеток, например клеток шиповатого слоя, в окружении клеток зернистого слоя, кроме того, нередко встречаются участки где отсутствуют блестящий и роговой слои, либо в этих слоях замурованы отдельные клетки зернистого, а иногда и шиповатого, слоев. Это свидетельствует о высокой скорости процесса дифференцировки.

Из таблицы № 1 видно, что в целом параметры регенерирующего эпидермиса на 13 день приобрели сходство с аналогичными параметрами интактной кожи. У животных контрольной группы наблюдается гиперподукция эпидермиса, он несколько утолщенный, складчатый, в глубину соединительно-тканного рубца уходят тяжи эпителия, нередко образующего скопления кератина. Безусловно, более низкая удельная доля базального слоя связанна с большей удельной долей остальных слоев эпидермиса. Сам по себе базальный слой состоит из одного слоя клеток и не может оказывать существенного влияния на изменения в процентном соотношении остальных слоев эпидермиса. В контрольной группе обращает на себя внимание высокая удельная доля блестящего слоя, что свидетельствует о недостаточно быстром образовании рогового слоя (см. табл.1).

У животных первой и второй групп наоборот зона блестящего слоя минимальна (P>0.999 ср. с контpoлем.). Однако механизмы этого явления разные. Если в первой группе большая удельная доля рогового слоя (Р>0.99) свидетельствует об ускоренной дифференцировке блестящего слоя в роговой, то во второй группе явно замедленно превращение зернистого слоя в блестящий, о чем свидетельствует высокая удельная доля зернистого слоя (P>0.999). Таким образом, можно констатировать незначительные отклонения в наиболее зрелых зонах эпидермиса у животных опытных и контрольной групп. Наименее дифференцирована структура эпидермиса у животных контрольной группы, затем следуют животные первой группы и второй групп. В тоже время на гистосрезах кожи животных первой группы отчетливо видны различия толщины и структуры регенерирующей кожи. В центральной зоне толщина эпителия минимальна, формирование наиболее зрелых слоев – зернистого, блестящего и рогового не закончено. На основании анализа полученной информации мы предполагаем что изучаемый препарат несколько тормозит образование клеток, замедляя процессы обновления эпидермиса, что дает больше времени для полноценной дифференцировки эпидермиса. Кратковременное применение препарата возможно с косметической целью т.к. эпидермис при этом более гладок, образует меньше впячиваний в рубцовую ткань.

Таблица № 2. Морфометрические характеристики грануляций.

Через 3 дня, после начала эксперимента на препарате виден струп, граница струпа инфильтрирована нейтрофилами и лимфоцитами с признаками кариопикноза и рексиса. Подкожная соединительная ткань густо инфильтрирована лимфоцитами, нейтрофилами. Плотноклеточность ткани довольно высока (см. табл. №). Уже появилось много фибробластов. Ядра этих клеток гиперхромны, часты фигуры митозов. Сосуды, как в зоне поражения, так и в смежных участках, находятся в состоянии активной гиперемии. Часты мелкие капиллярные кровоизлияния. Различий, по изучаемым параметрам, между опытными и контрольной группой, не обнаружено (см.табл.2).

Таблица № 3. Морфометрические характеристики грануляций.

6 день эксперимента.

Через 6 дней в струпе видны гранулярные остатки ядерного вещества, граница между струпом и тканью стала более отчетливой. Инфильтрация соединительной ткани иммунокомптентными клетками резко снизилась. Идет активное образование грануляционной ткани, характеризующееся хорошо выраженным неоваскулогенезом. Сформировавшиеся капилляры ориентированы преимущественно перпендикулярно раневой поверхности, расширены, имеют синусоидальный тип. Хорошо видно как адвентициальный слой участвует в образовании новой соединительной ткани. Фибробласты и фиброциты имеют вытянутую форму и ориентированны перпендикулярно адвентициалномы слою сосуда, образуя упорядоченные структуры в виде частокола. Плотноклеточность ткани по прежнему высокая (см. табл.3) но она обусловлена обилием фибробластов. Признаки воспалительного процесса исчезли.

Таблица № 4. Морфометрические характеристики грануляций.

К концу эксперимента (13 дней) наблюдается резкое уменьшение диаметров сосудов, большинство из них спавшиеся, но количество в поле зрения увеличилось (вероятно, это связано с ретракцией гранулемы). Резко уменьшилась плотноклеточность рубцовой ткани. Увеличилось количество фиброцитов. Изменилась структура межклеточного матрикса, оксифильность, увеличилось количество крупных фибрилл, резко уменьшилась упорядоченность строения соединительной ткани обусловленная ориентацией сосудов гранулемы и генезисом клеток соединительной ткани. По видимому, наблюдается перестройка гистоархитектоники клеточно-волоконного аппарата с учетом функциональных нагрузок. В целом, во всех группах наблюдаются признаки образования зрелой, в функциональном и морфологическом отношении, рубцовой соединительной ткани. Некоторые отклонения можно наблюдать у животных первой группы. Где в центральной части раны плотноклеточность, обусловленная высоким количеством фибробластов, несколько выше. Установлено статистически достоверное (Р >0,99) уменьшение объема сосудистого русла в обеих опытных группах.

Тем не менее. Мы не обнаружили выраженного негативного эффекта препарата на процессы регенерации соединительной, и эпителиальной ткани. Препарат не оказывает тормозящего действия на неоваскулогенез и процессы инфильтрации иммунокомпетентными клетками. Препарат способствует ускорению редукции грануляционной ткани и замещению ее фиброзной.

Обнаружен любопытный эффект, выражающийся в изменении процессов созревания эпидермиса и уменьшении признаков деформации образующегося эпителия. Вероятно, данный препарат может быть перспективен в плане изучения его косметического эффекта на регенерирующую кожу.

Минимальные негативные отклонения от нормы наблюдались при нанесении препарата два раза в день.