НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСМОТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ

-У СОБАК И КОШЕК

-У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ

Максимальной осмотическую резистентность эритроцитов

Минимальную осмотическую резистентность эритроцитов

Амплитуду осмотической резистентнности

В комплект набора входят:

Плашки на 12 проб каждая 4 шт

Растворитель 50 мл 1 фл

Инструкция по применению

Информационный листок или дискета с программой для обработки и хранения информации

ИНСТРУКЦИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ.

В комплект набора входят:

-4 плашки на 12 проб крови каждая

-растворитель 50 мл

-инструкция по применению

-информационный листок

Набор позволяет определять 3 параметра:

- максимальную осмотическую резистентность (ОR max)

- минимальную осмотическую резистентность (OR min)

- амплитуду (Amp)

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

На каждой планшетке имеется 12 рядов луночек, по 8 в каждом. Одна проба крови раскапывается во все 8 лунок одного ряда. На планшетку нанесены буквы, каждая буква соответствует показателю осмотической резистентности.

A - 0,9%

B - 0,69%

C - 0,602%

D - 0,527%

E - 0,461%

F - 0,404%

G - 0,3535%

H - 0,3093%

1. Перед проведением анализа необходимо внести в каждую лунку 400 мкл растворителя и выждать минимум 30 минут, до полного растворения реактива.

2. Кровь стабилизированную любым антикоагулянтом вносить в лунки

в объеме не более 10 мкл одинаковыми порциями. Для внесения крови можно использовать аппарат Такачи, автоматическую микропипетку, или одноразовай шприц (обмакивая иглу в раствор, когда на ней появится 1/4 капли). Вносить кровь необходимо начиная с лунки Н и заканчивая А.

3.Планшеты инкубируют 4-12 часов (на ночь) при комнатной температуре.

4.Учет реакции. Лунка А является контрольной, наличие гемолиза в ней свидетельствует об аутогемолизе.

ОR min определяют устанавливая координаты лунки находящейся перед лункой с первыми признаками гемолиза.

OR max определяют устанавливая координаты лунки находящейся перед лункой с полностью гемолизированными эритроцитами (осадок эритроцитов не виден).

Amp определяют вычисляя разницу меду OR min и OR max.

Гемолиз характуризуется появлением красного прозрачного слоя над дном лунки. Если гемолиз полный то дно лунки прозрачно на просвет.

Для установления гемолиза следует смотреть на плашку снизу и чуть сбоку.

5. Условия хранения набора. Неактивированные плашки и растворитель следует хранить при комнатной температуре в плотно закрытом виде. Если растворитель внесен в плашки то при комнатной температуре их можно хранить не более 4-х часов, герметично закрытыми крышками в холодильнике +5"С 2-3 недели. Плашки не следует переворачивать. Использованные плашки могут быть отданы производителю для регенерации.

АНАЛИЗ ПОЛУЧЕНОЙ ИНФОРМАЦИИ

Осмотическая резистентность эритроцитов отражает стабильность клеточных мембран. Нарушение осмотической резистентности является частым следствием стрессов, неблагоприятной экологической ситуации, интоксикаций и важным звеном патогенеза, а иногда и этиологическим фактором многих болезней.

Нарушение стабильности клеточных мембран связано с усилением перекисного окисления липидов (ПОЛ). При этом в билипидном слое плазмолеммы происходит накопление диенового коньюгата, который впоследствии превращается в молоновый диальдегид, сшивающий моллекуля липидов и понижающий текучесть мембраны. Вследствие этого мембрана становится более хрупкой. Нарушаются процессы связанные с изменением поверхности мембраны-фагоцитоз, пиноцитоз, клеточная миграция и др. Значительно снижается чувствительность клетки к ряду гормонов, управляющих вункциональной активностью клетки с ее поверхности. В частности к таким гормонам относятся гормоны щитовидной железы. Поэтому недостаток иода нашей биогеохимической провинции особенно неблагоприятен для животных с пониженной осмотической резистентностью.

При использовании нашей тест-системы вы можете получить следующие результаты:

1. Снижение стабильности мембран сопровождается уменьшением OR min и повышением амплитуды, либо уменьшением как OR min, так и OR max.

2. Повышенный распад эритроцитов под воздействием токсинов, гемолизинов, вирусов и др. сопровождается в первую очередь повышением OR max. Аmp может быть неизменна, что свидетельствует о преимущественном разрушении старых эритроцитов (т.е. время абсорбции гемолитического агента довольно велико).

3. Повышение как OR min, так и OR max свидетельствует о быстром действии гемолитического агента, либо говорит о его угнетающем действии на эритропоэз.

4. Если OR min понижен, а OR max повышен, как и амплитуда, значит наряду с активным распадом эритроцитов, идет активное образование новых клеток красной крови. Об адекватности данной компенсаторной реакции наблюдаемому пат. процессу, можно судить по наличию или отсутствию ретикулоцитов, анемии, содержанию гемоглобина в эритроцитах.

5. Уменьшение OR min может наблюдатся при резком выбросе незрелых эритроцитов.

7. Повышение OR min в сочетании с анемией свидетельствует в первую очередь о нарушении образования новых эритроцитов. Здесь важно знать цветной показатель, что бы судить о стадии дифференцировки, на которой нарушилось образование эритроцитов. Полезна информация и о наличии лейко- и лимфопении позволяющая делать выводы об обширности действия повреждающего агента и анализа общих мишеней для этого агента на разных ветвях гемопоэза.

8. В принципе можно рассуждать и об интенсивности обмена эритроцитарной массы в организме. Общеизвестно, что эритроциты разрушаются преимущественно в селезенке. В условиях вирусной инфекции, эритроцит сорбирует на себя вирусы и токсины, осуществляя презентацию антигена иммунокомпетентным клеткам селезенки. По нашим данным у хроников, интенсивность этого процесса низка. Искуственное стимулирование этого процесса обостряет действие защитных механизмов. Но не следует этого

делать у истощенного животного.

Предлагая Вам нашу тест-систему, мы руководствовались концепцией фармако-диагностических связок. Суть которой в том, что детализация диагноза, патогенеза или этиологии должна ограничиватся возможностями практических меропроиятий со стороны врача или зоотехника.

Если полученные данные свидетельствуют о нарушении ПОЛ, мы рекомендуем применить антиоксиданты природного или синтетического происхожения, проанализировать и повысить содержание в рационе меди, селена, витаминов F, Е, А, серосодержащих аминокислот. Помните, что недостаток

иода даст кумулятивный отрицательный эффект. С недостатком меди кореллирует пониженное содержание церулоплазмина. В терапевтические комплексы можно включить такие препараты, как дибунол, индерал, хлороквин, динфен, пепсидол и др.

Иногда может возникнуть потребность в активизации обмена эритроцитарной массы. Для этого можно применить некоторые эфирные масла.

Если анализ показывает, что основная проблема в токсигенном воздействии следует уделить вниманию поиску источника токсина и борьбе с интоксикациями.

Если причина анемии нарушение эритропоэза, примените стимуляторы эритропоэза, в соответствии с полученными данными о механизме нарушения.

Известно что “Рантатрин” и его аналоги проявляют прооксидантные свойства усиливая обменные процесс в мембране и, в отличие от других инициаторов свободнорадикального окисления, способствуют повышению текучести мембран, что благоприятно сказывается на функционировании клетки. При воздействии различных стресс-факторов (перелом например) в мембране клетки повышается перекисное окисление липидов ПОЛ, что сопровождается образованием малонового диальдегида. Задерживаясь в клетке малоновый диальдегид способствует образованию белково-липидных сшивок, что повышает вязкость и жесткость мембраны, снижает устойчивость клеток к деформации, снижает активность многих ферментов и гормонов, это ускоряет процессы старения клеток. Установлено что рантатрин оказывает обратное действие снижая концентрацию малонового диальдегида в клетке [6]. Установлено что пантокрин тоже снижает концентрацию малонового диальдегида в печени и головном мозге [6]. Механизм действия повышения текучести мембран заключается в увеличении включения фосфата в фосфатидиловую кислоту и инозилфосфатиды мембран, а также повышении уровня полиненасыщенных длинноцепочечных жирных кислот за счет ацилирования лизолецитина ацилКоА: лизолецитилацилтрансферразой [31].

Авторы: Афонюшкин В.Н., Леонов С.В.

Приглашаем к сотрудничеству по изучению статистических параметров осмотической резистентности на с/х животных и птице, распределения этих параметров в популяции и применению этих данных для практических целей.