К вопросу о повышении титра референтного штамма ВК-1 (ВИЭВ) вируса ВД-КРС.
Афонюшкин В.Н. (аспирант)
Государственнеое Научное Учереждение
Институт Экспериментальной Ветеринарии Сибири и Дальнего Востока,
г. Новосибирск
Экономическое воздействие ВД-БС - инфекции велико и в основном это следствие иммунологической дисфункции и трансплацентарных инфекций (с различными последствиями внутриутробной инфекции) крупного рогатого скота (Harkness J.W. 1987; Baker D.C. 1987). Другой важной ролью этого вируса является наличие перекрестных серологических реакций с близкородственным вирусом классической чумы свиней.
В настоящее время основным способом диагностики данного заболевания является метод реакции нейтрализации на культуре клеток при исследовании сыворотки крови на наличие антител, применяя принцип парных сывороток, взятых с интервалом 3-4 недели.
Целью данной работы являлось повышение титра вируса вирусной диарреи (штамм ВК-1) для последующей постановки реакции нейтрализации. После длительного хранения при -20 С, титры вируса ощутимо снижались. Ранее для восстановления его активности, мы проводили серию (15-20) пассажей вируса на перевиваемой культуре клеток МДБК, инокулируя суспензию вируса в объеме 1/10, снижая объем инокулята до 1/20. Нередко на первых пассажах приходилось ждать ЦПД 100% 48-50 часов. Перед каждым последующим заражением вируссодержащую культуральную жидкость подвергали однократному замораживанию-оттаиванию.
В качестве примера можно привести серию из 7 пассажей проведенных по этой етодике.
На первом пассаже вирус, после хранения 7 месяцев при -20С, имел титр 10 -2,8 ТЦД50%.
Титр определяли по стандартной методике: 10х разведеними вируса заражали культуру клеток МDBК в дозе 0,1 мл суспензии вируса на 1 мл культуры. На каждое разведение отводили по 4 пробирки культуры. Контролем служили клетки не зараженные вирусом. Учет цитопатогенного действия проводили через 7 суток, ТЦД50% расчитывали по методике Рида и Менча. На последнем 7-м пассаже титр поднялся до 10-3 ТЦД 50%.После чего методика была изменена следующим образом. Объем инокулята на первом пассаже подняли до 1/4, снижая его на последующих пассажах до 1/10, но не допуская, чтобы ЦПД 80% наступало позднее 20 часов. Взяв тот же исходный пассаж, что и в первом опыте, на втором пассаже титр вируса был 10 - 3.2 ТЦД 50%. На третьем пассаже 10 -4,28 ТЦД50%. На четвертом пассаже 10-4.5 ТЦД50%. ЦПД 100% наступало через 20 часов.
Обсуждение результатов и выводы.
Из литературных данных известно, что цитопатические изменения монослоя после инокуляции полевых изолятов вируса ВД-БС не совпадают с увеличением титра вируса. Так, Сюрин В.И. (1972) отмечал максимальное увеличение титра вируса на 72 - 96 часов после заражения когда цитопатические изменения в монослое лишь начинали появляться.
По видимому, период полураспада вирусных частиц довольно короток, во вяком случае после разрушения большей части монослоя. Всвязи с этим укорочение интервала между пассажами, обеспечение высокой интенсивности, скорости инфекционного процесса на культуре клеток будет более оптимальным для достижения заданной цели, нежели длительное пассирование вируса.